05.16 Óriás pöfeteg Langermannia gigantea

Pöfeteg: óriás a réten

Az óriáspöfeteg igazi ínyencség a gombák között és egyetlen példánya akár egy egész családnak elég.

Az óriáspöfeteg (Langermannia gigantea, vagy Calvatia maxima)

Egyike a legnagyobb méretű vadon termű gombáknak, hiszen emberfej nagyságúra vagy akár még sokkal nagyobbra is megnő, átmérője 10-30 cm, sőt, félméteres is lehet. Nem is hasonlít a "klasszikus" gombaformához, hiszen a termőteste nem különül el kalapra és szárra, tönkre, hanem gömb alakú.

Fehér színű, idősebb korában barnásfehéres. Termőtestének külső burka teljesen sima, tapintása szarvasbőrre emlékeztet, a belső burok vékony, puha. Teljesen beérve a gombát körülvevő kettős burok széttöredezik, lehull, a termőtest vattaszerű belseje pedig szabaddá válik.

Ekkora lehet egy óriáspöfeteg egy almához képest

Húsa fiatalon fehér, tömött, sajtszerűen rugalmas, később zöldessárga, végül barna spóratömeggé érik. A spórák szétszóródása után a spóratömeg közötti finom, vattaszerű, barna színű laza fonalhálózat sokáig megmarad. Szaga kellemesen aromás, jellegzetes, erős, idős korban kellemetlenné válik. Íze meglehetősen semleges, ezért vagy más gombával keverik, vagy a szokottnál gondosabban fűszerezik.

Hol nő a pöfeteg?

Erdőszéleken, ritkás erdőkben, akácosban, bokros-füves helyeken terem, kertben, utak mentén is sokfelé előfordul. Főleg nyáron és kora ősszel terem.

Magyarországon és Közép Európában is ismert, bár nem gyakori, de igen feltűnő gomba. A pöfetegféléknek számos faja van, közülük a leggyakoribb a bimbós és óriás pöfeteg, de ismert a változékony, a szürke sötétedő, a tüskés pöfeteg is.

Miért jó pöfeteget fogyasztani?

Tápláló, értékes élelmiszer, nem hizlal, koleszterinmentes. Egy-egy nagyobb példányából egy egész család is jóllakhat. Remek húspótló, annál is inkább, mert fehérjéjének összetétele az állati fehérjéhez hasonló. Ezen kívül szénhidrátokat, ásványi sókat (foszfor, kálium, stb.), vasat, és kinint, B, D, E vitaminokat is tartalmaz. Egyik összetevőjének, a calvacinnak vírus- és tumorgátló hatást tulajdonítanak.Kiadós, laktató, ugyanakkor alacsony kalóriájú: száz grammja mindössze 35 kcal, 147 kJ energiatartalmú, így fogyókúrában és vegetáriánusoknak is kiváló.

Hogyan fogyasszuk a pöfeteget?

Csak a fehér színű és húsú példányok ehetőek. Húsa illatos, de gyorsan érik, ezért tanácsos hamar felhasználni. Szívós burkait le kell hámozni. Az idősebb gomba, ha belseje már sárgul, barnul, fogyasztásra alkalmatlan. Amíg belseje még fehér, jó, ehető. Legjobb szeletelve, rántva, így íze halszerű. Felhasználható elő- és főételként, sütve, más gombával keverve levesbe és hús mellé is. Jól szárítható, a szárítmánya is fehér, aromás, fűszeres, ezért kitűnő ételízesítő.

Tippek-tanácsok az óriáspöfeteghez

Az óriáspöfeteg mérete folytán más gombával nem téveszthető össze, könnyen felismerhető. A többi pöfetegfaj sokkal kisebb, ezekkel esetleg összetéveszthető a mérgező rőt áltrifla. (Ez egy burgonya alakú, rozsdásbarna színű, kemény gomba, pikkelyesen repedező, alul gyökerező, rövid tönkkel.)Igazán biztonságot természetesen a pöfetegek esetében is csak az nyújt, ha a vadon szedett gombákat megmutatjuk a gombavizsgáló szakembereknek. A gombából készült ételek megterhelik a gyomrot, megemésztésükhöz a húsoknál is hosszabb időre van szüksége a szervezetnek, ezért inkább ebédre fogyasszuk, mint vacsorára. Mint minden gombás ételre, a pöfetegre is igaz, hogy nagy víz- és fehérjetartalma miatt gyorsan romlik, könnyen elszaporodnak benne a kórokozók. Elromolva súlyos mérgezéseket okozhat, ezért a gombát tartalmazó ételeket csak frissen szabad elfogyasztani.

oooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooo

A Calvatia gigantea kivonata gátolja az A549 emberi tüdőrákos sejtek proliferációját

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5023580/

Go to:

Ebben a tanulmányban a Calvatia gigantea kivonat, a Lycoperdaceae családba tartozó ehető gombafajok daganatellenes mechanizmusának vizsgálata céljából a CCND1, CCND2, CDK4, p21, Akt, Bax, Bcl-2, p53, kaszpáz-3 és A kaszpáz-9-et az A549 tüdőrákos sejtekben értékeltük. A C. gigantea kivonat citotoxikus hatását XTT (2,3-bisz- (2-metoxi-4-nitro-5-szulfofenil) -2H-tetrazolium-5-karboxanilid) alkalmazásával vizsgáltuk. A C. gigantea kivonatot idő- és dózisfüggő módon kezeltük 25 μg / ml - 2 mg / ml tartományban az IC50 dózis meghatározása céljából. A C. gigantea kivonat IC50 dózisát 500 μg / ml-ben 72 órán át detektáltuk. Az expressziós eredmények szerint, míg a CCND1, CCND2, CDK4, Akt és Bcl-2 expresszió egyértelműen csökkent, a Bax, p53, kaszpáz- 3 és kaszpáz- 9 expresszió egyértelműen megnőtt az adagcsoportos sejtekben (A549 sejtek 500 μg / ml adaggal kezelték) C. gigantea kivonat 72 órán át). A p21 expresszióban azonban nem változott. A C. gigantea kivonat a CCND1, CCND2, CDK4, Akt és Bcl-2 expresszió csökkentésével, valamint a Bax, p53, kaszpáz-3 és kaszpáz-9 expressziójának növelésével indukálta a sejtciklus leállítását és apoptózist az A549 sejtekben. A gombák állítólagos rákellenes hatásuk miatt eukarióta szervezetek, amelyeket erősen használnak. Számos gombafajt használtak orvosi célokra, amelynek eredményeként számos olyan hatás van, mint például antibiotikus, antivirális és rákellenes hatások. Úgy gondolják, hogy a C. gigantea kivonat jelentős szerepet tölthet be a tüdőrák kezelésében egyetlen szerként vagy más gyógyszerekkel kombinálva.

Kulcsszavak: Apoptosis, Calvatia gigantea , Sejtciklus, Tüdőrák sejtvonal

Bevezetés

A rákot a homeosztatikus mechanizmusok kudarcát követő genetikai változások okozzák. A legtöbb kemoterápiás szert rák kezelésére használják. Ezek a szerek elpusztíthatják a daganatokat és bizonyos mértékben megállíthatják a rák előrehaladását, ám károsíthatják az egészséges sejteket és szöveteket. Ezért úgy gondolják, hogy a természetes termékekből nyert új rákellenes szerek kevésbé toxikusak és biztonságosabbak a rák gátlására (Hann és mtsai., 2002 ). A rákhoz kapcsolódó molekuláris haladás növekedése kevésbé toxikus kezeléseket eredményez. A molekuláris jelátvitel diszregulációja általában a megváltozott sejtnövekedéssel, a sejtciklus előrehaladásával és a rákos megbetegedések apoptotikus válaszaival jár. A jelátviteli utak diszregulációja a növekedési faktor receptorokban és / vagy a szabályozó fehérjékben a funkcionális mutációk túlexpressziójának és veszteségének / növekedésének eredménye (Yamasaki et al., 2007 ). Az utóbbi években a proto-onkogéneket és a tumor-szuppresszor géneket markerként használták a rák diagnosztizálásában. Az apoptózis a programozott sejthalál folyamata, és olyan tulajdonságokkal rendelkezik, mint a morfológiai változások, a kromatin kondenzációja és a kaszpázok aktiválása, a cisztein-aszparaginsav proteázok családja (Taylor et al., 2008 ). Az eukariótákban a sejtciklus előrehaladása a ciklin-függő kináz (CDK) egymást követő aktiválásától függ, amelynek aktiválása a ciklinhez kapcsolódik (Pan és mtsai., 2002 ). A CDK-k meghatározott időközönként kötődnek a ciklinhez a sejtciklus előrehaladása során, és ezek a komplexek aktiválódnak (Ahmad és mtsai., 2001 ). A Cyclin D1 túlzott mértékben expresszálódik diszregulált növekedési faktorok vagy génamplifikáció eredményeként sokféle rákban (Chen és mtsai., 2008 ).

A tüdőrák a világon a férfiak és a nők leggyakoribb rák típusa. A tüdőrákban is magas a megismétlődés előfordulási gyakorisága és nehéz kezelni (Khuri et al. 2001 ; Li et al. 2004 ; Molina et al. 2006 ). A nem kissejtes tüdőrák (NSCLC) a teljes tüdőrák 75-80% -át teszi ki. Annak ellenére, hogy a tüdőrák kezelési módszerei folyamatosan fejlődnek, ez a rák továbbra is a rákos halálesetek első számú oka (Siegel et al., 2014 ). Az előrehaladott NSCLC-ben szenvedő betegek kezelésének leggyakoribb módszere a ciszplatin vagy a platina-alapú kemoterápia. Ezeknek a gyógyszereknek rendkívül toxikus hatása van, alacsony túlélési profilokkal (De Petris és mtsai., 2006 ).

Körülbelül 2000 gombafaj biztonságos emberi fogyasztásra, mivel ezeknek a gombáknak körülbelül 650-nek gyógyászati jellemzői vannak (Rai és mtsai., 2005 ). A gyógygomba olyan organizmusok nagy csoportját alkotja, amelyeket antivirális, antimikrobiális, gyulladásgátló, hiperglikémiás és rákellenes hatások miatt használnak erősen (Jiao et al. 2013 ). A gombákat erősen használják állítólagos rákellenes hatásuk miatt. A Lycoperdaceae családba tartozó C. gigantea ehető gombás faj. Azt jelentették, hogy a C. gigantea , amely az egyik puffgolyó, érzéstelenítő hatása miatt felzárkóztatáshoz használható. Az Agaricomycetidae, Agaricales, Lycoperdaceae családjába tartozó puffball óriás típusú gombák. Számos tanulmány kimutatta, hogy sok aktív vegyületet találtak a labdában (Kahlos és mtsai., 1989 ; Nam és mtsai., 2001 ). Számos tanulmány kimutatta, hogy a puffballból izolált egyes fehérjék és peptidek daganatellenes aktivitással rendelkeznek. A rákellenes faktor kalvacint először izolálták a C. gigantea-ból , amely a basidiomycota fajhoz tartozik és amelyet régóta gyógyászati táplálékként is felhasználtak, Roland et al. ( 1960 ).

Egy tanulmányban arról számoltak be, hogy a C. caelata-ból izolált CULP-protein antiproliferációs hatással van az emlőrákos sejtekre (Lam et al., 2001 ). Ezenkívül arról számoltak be, hogy néhány gombában lévő vegyi anyag vagy biológiai anyag gátolja a rák előrehaladását a sejtciklus leállításának és az apoptózis kiváltásával (Hseu et al., 2014 ).

Ebben a tanulmányban a C. gigantea kivonat daganatellenes mechanizmusának vizsgálatát tűztük ki a CCND1, CCND2, CDK4, p21, Akt, Bax, Bcl-2, p53, kaszpáz-3 és kaszpáz-9 expressziós esélyeinek kiértékelésével A549 emberben tüdőrák sejtvonal. Bebizonyítottuk azt is, hogy a C. gigantea kivonat le tudta szabályozni a CCND1, CCND2, CDK4, Akt és Bcl-2 expresszióját, és fel tudta szabályozni a Bax, p53, kaszpáz-3 és kaszpáz-9 expresszióját.

Go to:

Anyagok és metódusok

Makró gombás anyag és a C. gigantea kivonat készítése

A C. gigantea mintáinak gyümölcstesteit a Törökország Denizli nyugati részén, a Gireniz-völgy környékén lévő erdőben gyűjtötték a terepmunkák során a 2010 és 2012 év között. A makrofung azonosítását és osztályozását a gombafejlesztési és alkalmazási központ laboratóriumában végezték, a Pamukkale Egyetem, Denizli, Törökország.

A friss gombát véletlenszerűen három 75 g-os mintára osztottuk, majd az elemzés előtt szárítószekrényben 40 ± 0,1 ° C-on szárítottuk. Körülbelül 25 g szárított gombamintát lemértünk, majd extraháltuk 250 ml metanollal, szobahőmérsékleten, 150 fordulat / perc sebességgel, 24 órán át keverjük, és a Whatman No. 4 szűrőpapíron szűrtük. A maradékot ezután további 250 ml metanollal extraháljuk, a fentiek szerint. Az egyesített metanolos extraktumokat ezután forgóbepárlón 40 ± 0,1 ° C hőmérsékleten száraz extraktum előállítása céljából újra feloldottuk metanolban 10 mg / ml koncentrációra és 4 ° C-on tároltuk a további felhasználáshoz.

Sejttenyészet és vegyi anyagok

A549 humán tüdőrák sejtvonalat (az ATCC-től, Manassas, VA, USA) szereztünk be ebben a tanulmányban. A trizol reagenst az Invitrogen cégtől (Carlsbad, CA, USA) vásároltuk. A következő vegyszereket vásároltuk a Biological Industries-től (Kibbutz, Beit Haemek, Izrael): DMEM táptalaj, penicillin / sztreptomicin keverék, foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS), hő-inaktivált magzati szarvasmarha szérum (FBS), XTT reagens-sejt proliferációs készlet. A transzkriptor első szálú cDNS szintéziskészletét a Roche Diagnostics cégtől (Mannheim, Németország) vásároltuk. A tripánkék oldatot, nátrium-dodecil-szulfátot (SDS), 2-amino-2- (hidroxi-metil) -1,3-propándiolt (TRIS) a Sigma-Aldrich Chemical Company-től (St. Louis, MO, USA) vásároltunk.

Az A549 sejteket 2 mmól / 1 l- glutaminnal, penicillinnel (20 egység / ml), sztreptomicinnel (20 μg / ml) és 10% (térfogat / térfogat) hővel inaktivált magzati szarvasmarha szérummal kiegészített DMEM táptalajban, 37 ° C-on, telített páratartalmú légkör, amely 95% levegőt és 5% CO 2 -ot tartalmaz. Az A549 sejteket 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 750 μg / ml, 1 és 2 mg / ml C. gigantea kivonattal kezeltük 72 órán át, időt és dózistól függően.

Citotoxicitási vizsgálat

A citotoxicitási vizsgálatokat és a C. gigantea kivonat IC50 dózisának meghatározását az A549 emberi tüdőrákos sejtekben tripánkék festékkizárási teszttel és XTT-teszttel végeztük, a gyártó utasításai szerint. A sejteket 96 üregű szövetlemezeken oltottuk be, lyukonként 1x104 sejttel, és 24 órán át inkubáltuk reagens nélkül. 24 órás inkubálás után a sejteket különböző koncentrációjú (0-2 mg / ml) C. gigantea kivonattal kezeltük, és 24, 48 és 72 órán át inkubáltuk. A reagensek hozzáadása után a sejtek életképességét XTT keverék (0, 1 ml aktivációs oldat és 5 ml XTT reagens) alkalmazásával értékeljük a szállító ajánlása szerint. A formazán képződését spektrofotometriásán, 450 nm hullámhosszon (referenciahullámhossz 620 nm) számszerűsítettük mikrotiterlemez-leolvasó segítségével. A kísérletet háromszor megismételjük. Az életképességet a háttérrel korrigált abszorbancia felhasználásával számítottuk ki az alábbiak szerint:

Életképesség (%) = a kísérleti kút abszorbanciaértéke / a kontroll kút abszorbanciaértéke × 100

RNS izolálás és félig kvantitatív RT-PCR

A teljes RNS-t izoláltuk a sejtekből, amelyeket IC50 adagnak (500 μg / ml 72 órán át) tettünk ki, C. gigantea kivonat 500 μl Trizol reagensben, a gyártó utasításai szerint. Az első szálú cDNS szintézist lehorgonyzott oligo (dT) primer és RNase protektor inhibitor alkalmazásával hajtottuk végre a gyártó protokollja szerint (Roche Diagnostics). Megfelelő ciklusokat választottunk a PCR amplifikáció befejezésének biztosítására.

A félkvantitatív PCR-termékeket 2% agaróz-gélelektroforézissel elemeztük, etidium-bromidos festéssel szemléltettük és UV-fény alatt fényképeztük. Ebben a tanulmányban bemutattuk a CCND1, CCND2, CDK4, p21 és Akt gén expressziókat a PCR termékek hozamának a GAPDH háztartási génnel történő összehasonlításával . A kísérletet háromszor megismételjük.

Western blot elemzés

A sejteket PBS-sel mostuk, majd jéghideg körülmények között lizáltuk. Röviden: az összes fehérjét az A549 sejtekből és az adagcsoportot RIPA pufferrel (50 mM Tris, pH 8, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 0,5% nátrium-dezoxikoiát, 0,1% SDS) extraháltuk proteáz inhibitor koktélokkal kiegészítve. A fehérjemintákat (100 μg fehérje) 8,5% -os poliakrilamid gélen elválasztottuk. A fehérjéket a SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate (Pierce, Rockford, IL, USA) alkalmazásával detektáltuk, és a sávokat megjelenítettük és rögzítettük a GelQuant kép elemző szoftver segítségével egy DNR LightBIS Pro képanalízis rendszerben (DNR Bio-Imaging Systems Ltd., Jeruzsálem, Izrael). ). A kísérletet háromszor megismételjük.

Statisztikai analízis

Az elemzéseket a '' Student t teszt '' alkalmazásával értékeltük az SPSS 17.0 statisztikai elemző programmal.

Go to:

Eredmények

A C. gigantea kivonat anti-proliferációs hatása az A549 sejtvonalban

Az A549 sejtpusztulást a C. gigantea extraktummal végzett kezelés során XTT (2,3-bisz- (2-metoxi-4-nitro-5-szulfo-fenil) -2h-tetrazolium-5-karboxanilid) vizsgálati módszerrel határoztuk meg. Az A549 sejtek érzékenységének dózisfüggő csökkenését találtuk. Ebben a tanulmányban az A549 sejtekben a C. gigantea kivonat IC50-adagja a 72. órában 500 μg / ml volt (1. ábra).

1. ábra

A C. gigantea kivonat koncentrációjának és időfüggő gátló hatása az A549 sejtek életképességére. A sejtek életképességét XTT vizsgálattal határoztuk meg, és az életképes sejtek százalékában jelentettük a kontrollhoz viszonyítva. Az adatok három független kísérlet átlagos eredményei, átlag ± SD-ben kifejezve

Félkvantitatív RT-PCR

Ebben a tanulmányban a CCND1, CCND2, CDK4, p21 és Akt gének expressziós változásait félig kvantitatív PCR módszerrel vizsgáltuk A549 sejtekre, amelyeket C. gigantea kivonatnak tettek ki. Az mRNS szinteket elemeztük a C. gigantea kivonattal kezelt sejtekben, és ezt összehasonlítottuk a kezeletlen sejtek mRNS szintjével. Míg a dóziscsoportban a CCND1, CCND2, CDK4 és Akt gén expresszió csökkent, addig a p21 génben nem voltak expressziós változások a kontroll sejtekhez képest (2. ábra).